酵母菌群被分配到物種水平。
rRNA基因區域的擴展和限制
(埃斯特維-紮佐索等人,1999).入門PCR
its 1(50-ccgtaggtgactgcgg-30)和ITS4
(50-50-tcctcgcttattgatcg-30)用於
5.8種S rDNA基因上兩個可變區的擴增
(懷特等人,1990)。
從瓊脂傾斜的地方收集細胞的結果有好有壞。
70毫升牙簽,並重新懸浮在PCR混合物中
包括50 Li ITS1,50 Li ITS4,0.25 Li dNTPs。
(英國倫敦Bioline有限公司),1X NH4
+,2.5和中的MgCl2
1.2u Taqpolimerasa biotaktm(倫敦Bioline有限公司,
英國)。rRNA基因區域在熱循環儀中擴增。
基因安培PCR 9700系統(Perkin-Elmer,
美國馬薩諸塞州韋爾斯利)在以下條件下:
得分為5的在94 1℃初始變性;35個周期
1在94 1℃變性,並在55 1℃退火,
以及72 1°C處延伸2個點;以及最終的擴張。
在72 1 C. 10。
PCR產物(12毫升)被消化而不再繼續。
用限制性內切酶清除CFO I和Hae
III和Hinf I(羅奇,曼海姆,德國)根據
供應商的說明。最終,另外兩個核酸內切酶
用,Dde,我區別壹下。
漢遜酵母和漢遜酵母
Uvarum和Hpa II使釀酒酵母變得不同。
和s悖論。