萬歷二十七年，馬前成率三千人參加征討亳州，秦良玉又率五百將士自帶糧草，與副將周壹起鎮守鄧侃，阻止賊軍。
第二年正月初二，賊軍趁官軍宴會之際，發動夜襲。秦良玉和丈夫帶頭擊退賊軍，追擊到賊軍占領的地區，先後攻破朱槿等七處營寨。
之後配合酉陽各軍直取桑木關，擊潰賊軍，為南川路第壹軍。
平定叛亂後，秦良玉沒有居功。
後來，馬千成被部下痛斥，死在雲陽監獄。秦良玉代替了丈夫的位置。
秦良玉驍勇善戰，擅長騎射，又通曉詩詞歌賦，舉止優雅。
秦良玉被嚴格控制，每次行軍，軍隊都肅然起敬。
她領導的部隊被稱為“白桿兵”，遠近的部隊都非常害怕。