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如何修改測序峰

壹般用ABI3730儀器自帶的Analysisi 5.2修改。客戶通常使用Chromas軟件來查看峰圖。

測序公司發的測序結果壹般包括壹個峰文件和壹個序列文件。峰值文件為Abi格式,用chromas軟件打開(百度在線)。

如下圖所示,四種顏色的波形代表四個堿基的信號強度。在正常的峰圖中,峰和谷是清晰的,峰之間的距離是均勻的。理想的測序結果應不受底部其他峰的幹擾。

測序結果的前幾十個bp不能用來指下圖黃色區域標註的區域;這部分不可靠的數據需要在拼接序列或序列比對前去除,以免影響分析結果。

PCR產物測序時,由於PCR引物上的堿基是無染料的,所以檢測不到信號,測序結果中也找不到引物的序列。例如,PCR引物可以通過測序與載體相連的通用引物來找到。

測序公司給出的峰圖在1000 ~ 1200 BP之間,但800bp後有重疊波,峰鈍化,堿基之間的距離有時會突然增大(本圖812bp~813bp),會影響結果的準確性,只能作為參考。

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