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RNA提取的方法、步驟和原理。

RNA提取壹般采用Trizol法提取:

Trizol是壹種總RNA提取試劑,含有異硫氰酸胍等物質,能快速裂解細胞,抑制細胞釋放的核酸酶活性。目前常用Trizol法從組織或細胞中提取RNA。

Trizol作用原理:

Trizol試劑可以保持勻漿或溶解樣品中RNA的完整性,可以同時破壞細胞和溶解細胞成分。加入氯仿離心後,將裂解物分成水相和有機相。RNA存在於水相。

水相轉移後,通過異丙醇沈澱回收RNA。除去水相後,可以用乙醇從中間相中沈澱出DNA,加入異丙醇沈澱可以從有機相中得到蛋白質。

擴展數據不同於DNA。壹般RNA是單鏈分子,不形成雙螺旋結構。而很多RNA也需要通過堿基配對的原理形成壹定的二級結構甚至三級結構才能發揮其生物學功能。

RNA的堿基配對規則和DNA基本相同,但除了A-U和G-C配對,G-U也可以配對。

在細胞中,根據結構和功能的不同,RNA主要分為三類,即tRNA(轉運RNA)、rRNA(核糖體RNA)和mRNA(信使RNA)。MRNA是合成蛋白質的模板,它的內容是根據細胞核中的DNA轉錄的。TRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識別體,也是氨基酸的轉運體。RRNA是核糖體的組成部分,是蛋白質合成的工作場所。

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